細胞培育室設計方案
組織細胞培養技術(shù)與其他一般實(shí)驗室工作的主要區別在于要求保持無(wú)菌操作,避免微生物及其他有害因素的影響。
一.細胞培養實(shí)驗室包括:無(wú)菌操作、孵育、制備、清洗、消毒滅菌處理、儲藏。
1.無(wú)菌操作區
(1)無(wú)菌操作室應劃為三部分:更衣室、緩沖間、無(wú)菌操作間無(wú)菌操作間專(zhuān)用于無(wú)菌操作、細胞培養。其大小要適當,且其頂部不宜過(guò)高(不超過(guò)2.5m)以保證紫外線(xiàn)的有效滅菌效果;無(wú)菌操作間的空氣消毒:紫外線(xiàn)燈產(chǎn)生臭氧,并且室內溫度及濕度均較高,不利于工作人員健康。空氣過(guò)濾的恒溫恒濕裝置。
(2)凈化工作臺:操作簡(jiǎn)單,安裝方便,占用空間小且凈化效果很好。一般細胞培養室使用的凈化工作臺主要有兩種:a)側流式或稱(chēng)垂直式 b)外流式或稱(chēng)水平層流式。
2.孵育區本區對無(wú)菌的要求雖不比無(wú)菌區嚴格,但仍需清潔無(wú)塵,因此也應設置在干擾少而非來(lái)往穿行的區域。
3.制備區在該區主要進(jìn)行培養液及有關(guān)培養用的液體等的制備。
4.儲藏區主要存放各類(lèi)冰箱、干燥箱、液氮罐、無(wú)菌培養液、培養瓶等,此環(huán)境也需要清潔無(wú)塵。
5.清洗和消毒滅菌區清潔和消毒滅菌區應與其他區域分開(kāi),主要進(jìn)行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消毒及三蒸水制備等工作。
(二)細胞培養實(shí)驗室的設備
a)顯微鏡:倒置顯微鏡——是組織細胞培養室所必需的日常工作常規使用設備之一,便于掌握細胞的生長(cháng)情況并觀(guān)察有無(wú)污染等。若有條件,尚可配置帶有照相系統的高質(zhì)量相差顯微鏡、解剖顯微鏡、熒光顯微鏡、錄像系統或縮時(shí)電影拍攝裝置等,以便隨時(shí)觀(guān)察、記錄、攝影細胞生長(cháng)情況。
b)CO2培養箱——目前多數的細胞培養室已廣泛使用。CO2培養箱的優(yōu)點(diǎn)是能夠提供進(jìn)行細胞培養時(shí)所需要的一定量的CO2(常用濃度為5%),易于使培養液的pH保持穩定,適用于開(kāi)放或半開(kāi)放培養。
c)水純化裝置:細胞培養對水的質(zhì)量要求較高,細胞培養以及與細胞培養工作相關(guān)的液體的配制用水必須事先嚴格純化處理。目前國內使用較多的是自動(dòng)雙重純水蒸餾器(石英管加熱),使用方便,安全、蒸餾速度快(1600ml/h)。
d)冰箱:細胞培養室必須配備
e)細胞冷凍儲存器:儲存器常用的是液氮罐。
f)離心機:一般可常規配置4000rpm的國產(chǎn)臺式離心機,例如細胞沉降,使用80~100g的離心機即可,離心力過(guò)大有時(shí)可能引起細胞的損傷。
g)天平:常用的有扭力天平、精密天平及各種電子天平。
h)濾器:多采用濾過(guò)消毒以除去細菌。
i)培養用器皿耗材:培養瓶、培養皿:、多孔培養板、貯液瓶、吸管、加樣器等
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